自Ignatova等开展胶质瘤干细胞(GSCP)研究以来，至今多位学者证明，无论是体外培养还是组织标本中的胶质瘤细胞，均具有无限增殖和向亲本肿瘤细胞类型分化的潜能怛引。因GSCP与神经干细胞相...
自Ignatova等开展胶质瘤干细胞(GSCP)研究以来，至今多位学者证明，无论是体外培养还是组织标本中的胶质瘤细胞，均具有无限增殖和向亲本肿瘤细胞类型分化的潜能怛引。因GSCP与神经干细胞相似，故研究者纷纷推测GSCP来自NSCP。然而在分析两者分化走向的差别时又发现，GSCP的分化抑制几乎是一种永恒的表现，而NSCP可以分化为成熟的细胞。研究者通过对GSCP的超微结构进行观察和分析，旨在揭示其中的原因。
文献研究（材料与方法）
1．主要试剂：碱性成纤维生长因子(bFGF)、N2添加剂为GIBCO公司产品，表皮生长因子(EGF)、白血病细胞抑制因子(LIF)为IIlvitrogen公司产品。兔抗人nestin抗体为BDBiotec公司产品，小鼠抗人CD133抗体为miltenyiBiotec公司产品，小鼠抗人B-TUBULIN抗体、DAPI为SantaCruz公司产品。
2．细胞培养：研究者培养成功的GSCP球(来自l例间变性星形细胞、室管膜细胞混合瘤患者的手术标本)，已在体外连续培养超过42个月，CD133表型稳定。采取文献的方法，从该GSCP球离CDl33+细胞，置于含bFGF(终浓度20ng／ml)EGF(终浓度20ng／m1)、LIF(终浓度20ng／m1和N2添加剂的DMEM—F12(1：1)培养液中5％CO：条件下培养过夜后用于后续实验。同时，参照文献的方法，从3例药物(米非司酮)流产7~10周胎龄的新鲜人胚胎脑中分离培养NSCP。
3．实验样本质控：将GSCP和NSCP接种于多聚赖氨酸玻片上，在无血清条件下培养4h后，免疫荧光染色法检测其CDl33和nestin的表达，并用激光共聚焦显微镜观察、拍摄。同时，取GSCP在含10％胎牛血清的培养基中培养，诱导其分化，10d后收集细胞，其中一部分利用上述免疫荧光染色法检测其nestin、GFAP和b-tubulin3的表达情况，另一部分收集后用于透射电镜观察。
4．电镜标本制备与观察：分别取GSCP、NSCP以及GSCP的分化细胞约3×10个，充分吹打后离心，去上清，依次进行固定、脱水、浸透、包埋、切片及染色后，使用透射电镜在100kV条件下观察。
文献实验结果
1．NSCP和GSCP的质控结果：免疫荧光染色法检测结果证实，NSCP和GSCP球的组成细胞均为nestin+，部分细胞呈CDl33+导分化后，表达GFAP和B-tubulinⅢ。
2．细胞球：GSCP球中，部分相邻细胞间微绒毛消失，胞膜间隙约25nm，充满电子密度不等的物质，胞膜内侧形成宽约40nm的高密度带，似为未发育成熟的桥粒。部分相邻细胞的质膜平行走向，长达0．3—0．5um，并有宽约20nm的间隙，中间充满电子密度中等的无定形物质，胞质面有一些致密物质聚集，似为平行的板，并可见很多丝样物达情况，另质附着，后者伸向两侧，形似中间连接或发育欠佳的桥粒。未见其他较为典型的细胞间连接，也未见典型的凋亡样改变。GSCP分化细胞体外培养不成球，细胞间无细胞连接样结构。NSCP的相邻细胞间可见胞膜融合，融合处两侧胞浆电子密度相当，胞质均匀，附近可见囊泡样结构。
3．细胞膜：在透射电镜下，GSCP细胞可见微绒毛，有的微绒毛内仅有少量胞质，中心无特殊结构；有的微绒毛中心有成束微丝形成轴心，并延伸到胞质内。GSCP分化细胞的微绒毛长而且，而NSCP的微绒毛很不发达。
4．细胞质：GSCP的线粒体、高尔基体形态常，且较发达，但部分细胞的线粒体可见间隙及嵴内间隙肿胀，内室基质浓缩，电子密度增高，形成所谓的线粒体致密构型，其中的高尔基体也轻度扩张。GSCP的内质网短小，发育欠佳，表面附有核糖体，核糖体密度高，单核糖体和多聚糖体均较发达，后者可形成典型的核糖体玫瑰花。GSCP的胞质内还可见垂直分布的中心粒分细胞中可见少量沿核分布的胶质丝。酶体罕见，未见白噬小体。GSCP分化细胞可见噬小体和发达的粗面内质网和溶酶体结构(NSCP可见较多的自噬小体）。
5．细胞核与染色质：GSCP的核质比高，核，呈圆形或卵圆形，也有肾形和不规则形，后者得部分细胞核内可见假性包含体，可见分裂相。GsCP以单核仁为主，两个及以上者也不见，可清晰地辨认出纤维中心、致密纤维组分以及粒组分。核周隙宽约40—60nm，较正常细胞核周隙(20—40nIn)宽。染色质可分为常染和异染色质，前者明显多于后者。GSCP分化细以及NSCP核仁均不如GSCP明显，NSCP非常少见。
包裹的内容物，以实现细胞本身的代谢需要和对某些细胞器的更新埔J。Asanuma等一1在对的足细胞进行研究后推测，自噬的功能之一是促进细胞分化。我们观察发现，在NSCP和GSCP胞中均可见到丰富的自噬小体，而与NSCP和G分化细胞比较，无论是单细胞还是细胞球内的GS均缺少典型的自噬小体，其原因有待阐明，可能与单GSCP处于分化抑制状态有关。另外，GSCP少有细胞凋亡的超微结构表现，可能与启动细胞凋亡程序也依赖于自噬有关。
2．GSCP的细胞间连接：在GSCP细胞球的细胞间，我们观察到了发育欠佳的桥粒或者是中间连接样结构，因未行特异性的化学染色，还不能肯定于哪一种连接。我们认为，这种连接均为结构尚未成熟的表现，不是细胞间隙通讯连接GJI的公能结构Trosko也认为，祖细胞可受GJIc的细胞可通过癌基因的表达来抑制GJIC，从而使得胞间缺乏GJIC，进而缺乏生长控制以及向终末分化的能力。NSCP在分化上也很原始，其细胞球间虽然未能见到发育良好的GJlC样结构，但是相邻细间的胞膜融合，可以成为不同细胞间物质信息交流的有效途径，在胞膜融合处附近所见的囊泡样结构则可能是用于信号物质传输的小泡。
3．GSCP中的胶质丝和细胞器：胶质原纤维性蛋白(GFAP)是电镜下判断被检样本是否为星形胶质细胞起源的重要靶标，在星形胶质细胞起源的肿瘤细胞中，可或多或少见到其存在，然而细胞分化越差，其含量越少。我们在GSCP化细胞的胞浆中也见到了少量的胶质丝，这与其亲本肿瘤为恶性胶质细胞瘤的分子表型一致。但是。GSCP中胶质丝并非普遍存在，其含量比GSCP分化细胞要少，这也反映了GSCP在分化上的原始性。
胶质瘤细胞中的细胞器随着恶性级别增高而渐趋简单或缺乏，其中以粗面内质网最为典型。一般认为，发达的内质网是细胞分化好和功能活跃的标志，幼稚细胞或未分化细胞(如干细胞)的粗面内质网明显匮乏，粗面内质网的数量与肿瘤的生长速度和恶性程度呈负相关。我们也观察到，GSCP的内质网短小，发育欠佳，表明GSCP是中最原始的一种。
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